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      病毒載體系列丨腺相關病毒(AAV)載體

       

      腺相關病毒AAV有表達滴度高、宿主免疫反應輕微、感染譜廣、安全性高等優勢,成為近年來在基因治療領域應用廣泛的病毒載體之一。西美杰代理Cell Biolabs AAV Helper Free Expression System)的AAV三質粒表達系統是目前常用的一類AAV載體系統。

      https://www.cellbiolabs.com/sites/default/files/VPK-402%20Fig%201_0.jpg

      圖所示,該套AAV系統包含表達載體(Expression vector)、包裝質粒Rep-Cap plasmid)和輔助質粒pHelper plasmid)。其中表達載體是AAV病毒的核心,包含了ITR序列、CMV啟動子、多克隆位點等,用于攜帶外源基因;包裝質粒負責表達AAV病毒的結構蛋白,決定AAV的血清型和組織嗜性。由于野生型AAV是復制缺陷型的,必須依賴輔助病毒(如腺病毒)才可以感染靶細胞。AAV Helper Free Expression System利用在不同質粒上提供這些必要的輔助基因來確保重組AAV病毒具有感染性,消除AAV對輔助病毒的依賴,解決了AAV生產過程中要去除腺病毒污染難題。



      ?      Expression vector包含ITR序列,多克隆位點,攜帶目的基因;

      ?      Rep-Cap plasmid包含RepCap基因,決定了重組AAV的血清型和組織嗜性;

      ?      pHelper plasmid 包含腺病毒的VA、E2AE4基因,使重組AAV具有感染性。

      1. AAV表達載體

      AAV基因組為4.7kb,能夠攜帶的外源基因上限在4kb左右。Cell Biolabs提供了8AAV的表達載體,兼容常用的各種AAV包裝系統,表達載體都攜帶有2ITR序列,使AAV基因組能正確形成T-形二級結構,進而保證了病毒的有效復制和包裝。載體上有氨芐抗性基因、多克隆位點,還可以根據實驗需要選擇帶標簽、無標簽、不含啟動子或自身互補型self-complementaryAAV表達載體(產品詳情如下表)。

      貨號

      質粒名稱

      載體容量(kb

      特征

      VPK-415

      pAAV-IRES-Puro

      1.8

      Puro標簽

      VPK-416

      pAAV-IRES-Neo

      1.6

      Neo標簽

      VPK-417

      pAAV-IRES-Hygro

      1.4

      Hygro標簽

      VPK-418

      pAAV-IRES-GFP

      1.7

      GFP標簽

      VPK-419

      pAAV-IRES-Bsd

      2

      BSD標簽

      VPK-410

      pAAV-MCS

      3

      無標簽

      VPK-411

      pAAV-MCS Promoterless

      4

      啟動子

      VPK-430

      pscAAV-MCS

      1.5

      self-complementary

       

       

      1. AAV包裝質粒

      AAV共有12個血清型,其中AAV1-6是從人類組織中分離獲得,并且具有明確的的抗體反應性,是目前常用的經典AAV載體。盡管不同血清型AAV都具有正二十面體結構,但其衣殼蛋白在序列與空間構象上的多樣性,使得AAV與不同細胞表面受體親和力及組織嗜性存在顯著差異。在感染嗜性方面,AAV-2的感染譜較廣應用,AAV-1在骨骼肌中的轉導效率較高,AAV-3易于轉導巨核細胞,AAV-5AAV-6感染呼吸道上皮細胞的優勢較為顯著。因此,根據AAV不同血清型在組織感染性的相對特異性,可以用于在針對不同靶向組織的基因治療中尋求最佳的AAV載體類型與組合。除了常見的六個血清型AAV之外,Cell Biolabs還提供兩種重組型AAV包裝質粒AAV-DJAAV-DJ-8,如下圖所示,這兩種AAVRep-Cap基因是由多個野生型AAV的結構基因重組而來,與其他野生型相比,AAV-DJ在體外細胞轉導效率更高,AAV-DJ-8則更適用于體內感染實驗。

      常用的AAV-2為參照,下表比較不同血清型AAV對種屬、組織細胞的感染率。值得一提的是,AAV-DJ對不同物種的肝細胞、黑色素瘤細胞以及胚胎干細胞的感染能力都有絕對優勢,甚至高于常用的AAV-2。

      輔助質粒pHelper plasmid是確保重組AAV具有感染性的重要質粒,pHelper載體中包含了腺病毒的E2A、E4基因VA RNA,由于我們常用的AAV包裝細胞系293293T含有E1基因,因此該系統中的pHelper質粒上沒有再提供E1基因。

      AAV包裝質粒貨號Rep-Cap&pHelper plasmids

      VPK-401

      VPK-402

      VPK-403

      VPK-404

      VPK-405

      VPK-406

      VPK-400-DJ

      VPK-400-DJ-8

      細胞系

      組織類型

      AAV-1

      AAV-2

      AAV-3

      AAV-4

      AAV-5

      AAV-6

      AAV-DJ

      AAV-DJ/8

      Huh-7

      人肝臟

      13

      100

      2.5

      0.0

      0.1

      10

      500

      0.2

      HEK293

      人腎臟

      25

      100

      2.5

      0.1

      0.1

      5

      500

      0.3

      HeLa

      人子宮

      3

      100

      2.0

      0.1

      6.7

      1

      667

      0.2

      HepG2

      人肝臟

      3

      100

      16.7

      0.3

      1.7

      5

      1250

      0.5

      Hep1A

      小鼠肝臟

      20

      100

      0.2

      1.0

      0.1

      1

      400

      0.1

      911

      人視網膜

      17

      100

      11

      0.2

      0.1

      17

      500

      0.0

      CHO

      倉鼠卵巢

      100

      100

      14

      1.4

      333

      50

      25000

      5.0

      COS

      非洲綠猴腎臟

      33

      100

      33

      3.3

      5.0

      14

      500

      0.3

      MeWo

      人皮膚

      10

      100

      20

      0.3

      6.7

      10

      2857

      1.0

      NIH3T3

      小鼠成纖維

      10

      100

      2.9

      2.9

      0.3

      10

      500

      0.1

      A549

      人肺臟

      14

      100

      20

      ND

      0.5

      10

      1000

      0.1

      HT1180

      人成纖維

      20

      100

      10

      0.1

      0.3

      33

      333

      0.2

      Monocytes

      人原代單核細胞

      1111

      100

      ND

      ND

      125

      1429

      100

      ND

      Immature DC

      人樹突細胞

      2500

      100

      ND

      ND

      222

      2857

      200

      ND

      Mature DC

      人樹突細胞

      2222

      100

      ND

      ND

      333

      3333

      100

      ND

      ND = Not Determined


       

      西美杰代理的Cell Biolabs品牌除了提供AAV病毒的全套載體系統外,還有腺病毒(Adenovirus),慢病毒(Lentivirus)和逆轉錄病毒(Retrovirus)載體系統,為廣大科研用戶提供了高效、便捷的病毒載體產品庫,小編之后還會一一為大家介紹這些病毒載體,敬請期待!

      北京西美杰科技有限公司作為Cell Biolabs中國區代理,始終秉承著專業、嚴謹的態度為廣大生物科技領域科研與企業客戶提供高品質產品與優質服務,如果您對上述產品感興趣,歡迎隨時撥打全國客服熱400-050-4006或登錄西美杰官方網站www.www.rgbartadvisory.com查詢訂購!

       

       

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