抗體篩選是開發單克隆抗體藥物、ADC藥物和雙特異抗體等藥物的必經之路。目前常見的抗體篩選方法有雜交瘤技術、噬菌體展示技術、單B細胞抗體篩選技術等。不同于傳統的雜交瘤細胞技術或噬菌體展示技術，基于單B細胞篩選的新一代單克隆抗體開發平臺能夠快速獲取具有生物學功能的全天然單克隆抗體。

經典免疫學背景知識

  人和動物接受了外源性免疫原（如細菌、病毒、非同源蛋白等）的刺激后，獲得性免疫（Adaptive Immunity）被激活，并在T淋巴細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞等免疫細胞的協同作用下，由B淋巴細胞產生針對于該病原體（或免疫原）的抗體分子；B淋巴細胞經過一系列的成熟和分化之后，最終形成漿細胞（Plasma cell）將大量的IgG分泌到血液等循環系統中；而特定的某一個B淋巴細胞在經歷了V-D-J重排、ClassSwitch和Somatic maturation之后，只含有一對編碼IgG重鏈和輕鏈的基因。因此，經過B淋巴細胞表面標記物和抗原特異性篩選，可以獲得針對特異性抗原的單個B淋巴細胞，然后通過分子生物學手段從中獲得編碼抗體IgG的重鏈和輕鏈基因，并在體外重組表達驗證，這也是目前獲得單克隆抗體最有效和快速的技術。

一、抗體篩選技術

1.1雜交瘤單克隆抗體

雜交瘤單克隆抗體技術起源于1975年，英法兩國科學家將分泌抗體的鼠B淋巴細胞同具有無限擴增特性的骨髓瘤細胞融合形成兼具兩者特性的雜交瘤細胞。相比于多克隆抗體，單克隆抗體具有高度的抗原識別特異性和蛋白生產的均一性，在已批準上市的治療性抗體中，多數藥物是采用基于小鼠的雜交瘤技術路線。

1.2噬菌體展示技術

   噬菌體展示技術（phage display）是由 George P. Smith 于 1985 年開發的一種體外篩選抗體的方法。將不同的外源基因分別插入噬菌體載體中，隨著噬菌體的傳代，外源蛋白會展現在噬菌體表面，形成噬菌體文庫。隨后用特定蛋白對噬菌體文庫進行篩選，便可快速得到與該蛋白具有高親和力的抗體。該技術無需B細胞培養過程，但得到的抗體并非在B細胞中表達，可能導致構象改變，從而失去特異性。同時，重鏈和輕鏈的隨機組合使得抗體重鏈輕鏈無法保持天然配對。

1.3單 B 細胞篩選技術

  單個B細胞抗體技術作為新一代抗體開發技術，可以從單個B細胞中高效、快速的分離抗體，是繼雜交瘤、噬菌體展示后又一抗體產生技術的突破。其基本原理是從免疫動物或患者的組織或外周血中分離抗原特異性B細胞，篩選出分泌目標抗體分子的B細胞，結合單細胞PCR技術 ，擴增出IgG重鏈和輕鏈可變區基因，構建表達載體，進行表達、純化，篩選和鑒定，以獲取有效功能性抗體。

二、達普生物Comet高通量篩選平臺

   達普生物 Comet 高通量篩選平臺基于液滴微流控技術，通過熒光標記及介電泳力對油包水液滴進行高通量分選。分選前將單細胞與反應檢測體系包裹成油包水微液滴，在液滴中實現 ELISA 檢測，并基于反應體系熒光信號（即細胞功能）對陽性細胞液滴進行高通量分選，可依據細胞胞外分泌靶蛋白或胞膜或胞內生物標志物對功能性細胞篩選，將 ELISA 檢測與流式分選整合為一體，摒棄傳統費時費力的孔板法 ELISA 篩選。基于 Droplet ELISA 的功能細胞分選方式，單次可實現高達千萬級反應液滴即百萬級細胞分選，并可根據需要將陽性液滴打印至 96 孔板，自動保存對應孔的照片用于單克隆確認。相較于傳統的抗體制備技術，該技術保留了豐富的基因多樣性，重鏈輕鏈可變區天然配對，具有抗原特異性強、親和性高、物種不受限、后續篩選工作量低等優勢，大大節省人力和試劑成本，結合單細胞測試技術可直接獲得抗體基因序列，方便下游抗體工程改造，在抗體藥物研發、快速應對病原微生物傳染病方面具有巨大優勢。

三、達普生物Comet高通量篩選平臺

達普生物 Comet 高通量篩選平臺，可極大加速抗體藥物開發流程，縮減研發及生產成本，該平臺與目前市場上主流的基于微流控腔室技術的單細胞光導系統相比，有如下顯著優勢：

• 高通量：單次可實現高達千萬級反應液滴即百萬級細胞分選
• 速度快：將傳統數周的功能單細胞篩選工作縮減至 1-2 天內完成
• 成本低：減少樣本和試劑用量，試劑成本降至傳統方法的百萬分之一
• 可兼容：FRET法、磁珠法、微珠法、報告細胞法
• 更靈活：液滴生成后可靈活孵育條件、場所及顯微觀測
• 損傷：基于熒光標記和高壓介電泳力對油包水液滴分選，對細胞無損傷

   達普生物科技有限公司孵化于香港科技大學，于 2018 年由多位海歸博士共同創立。在深圳、嘉興、香港三地設有研發中心，研發團隊近 100 人，建立了集微流控芯片、儀器及試劑生產為一體的 GMP 廠房。達普生物是中國液滴微流控領軍企業，致力于提供世界領先的生命科學解決方案。達普生物已商業化多款基于液滴微流控技術的科學儀器，包括單細胞高通量篩選系統（Comet High ThroughputSorting System）、星海單細胞測序建庫系統（ Galaxy Single CellAnalysis System）與星云數字 PCR 系統（Nebula dPCR System）。應用于癌癥研究、癌癥早期篩查、靶向治療、無創產前診斷、病毒定量檢測、高通量藥物和抗體篩選等領域。北京西美杰科技有限公司是達普生物的代理商，如對產品感興趣，歡迎撥打西美杰客服熱線010-88597838或者登錄網站www.xmsjci.com了解更多信息。